Expressão heteróloga da quimera LTB/GnRH sintética em Pichia pastoris e seu efeito na resposta imunológica e no epitélio seminífero de camundongos
Resumo
Diversas proteínas recombinantes estão sendo pesquisadas para utilização na
imunocontracepção de mamíferos. Entre elas, o hormônio liberador de
gonadotrofinas (GnRH), entretanto devido ao seu baixo peso molecular há
necessidade de associá-lo a uma molécula carreadora. Dentre as plataformas
eucarióticas, encontra-se a levedura Pichia pastoris que tem possibilitado expressão
e modificações pós-traducionais das proteínas recombinantes. O objetivo deste
trabalho foi clonar e expressar a quimera LTB/GnRH em P. pastoris, visando sua
utilização como imunocontraceptivo. Para tanto, sequências com os códons
preferenciais de P. pastoris da proteína foram sintetizadas e clonada no plasmídeo
pPICZαB. O plasmídeo foi propagado e transformado na levedura por eletroporação.
As colônias transformadas foram selecionadas por resistência antibiótica e
confirmadas por Colony Blotting. O clone selecionado foi cultivado e após indução
expressou a proteína no sobrenadante. A proteína foi concentrada e utilizada como
antígeno vacinal. Camundongos BALB/c machos foram vacinados com duas doses
de 100µg de LTB/GnRH adsorvidas em hidróxido de alumínio com intervalo de 15
dias. A resposta imune foi avaliada por ELISA, mostrando soroconversão nos
animais imunizados. A concentração espermática no grupo controle foi 16,93 x 107 e
no grupo imunizado 8,00 x 107 espermatozóides/mL. A imunização induziu a
redução da espermatogênese (p < 0,05), vacuolização nos túbulos seminíferos e
desorganização testicular. Concluiu-se que a levedura foi capaz de expressar a
proteína LTB/GnRH recombinante e a mesma apresentou potencial
imunocontraceptivo em camundongos.