Geração de cDNAs, primers e caracterização estrutural do tegumento de sementes de soja
Resumo
A soja é uma das principais commodities mundiais e a semente o principal
insumo para sua produção. O tegumento das sementes é o principal modulador da
qualidade, podendo ser encontrado, nessa estrutura a resposta para a produção de
sementes com caracteres superiores para vigor e viabilidade. O estudo teve como
objetivo identificar características estruturais contrastantes, obter cDNA e desenhar
primers relacionados à síntese de lignina e deposição de cera em tegumentos de
sementes de soja de genótipos contrastantes em relação à permeabilidade CD 202
(permeável) e IAC Santa Maria 702 (semipermeável). As plantas foram cultivadas
em casa de vegetação e a partir da primeira floração as flores foram marcadas para
que o tempo de desenvolvimento de cada legume fosse identificado. Legumes com
25, 30, 35, 40, 45, 50, 55 e 60 dias de desenvolvimento foram coletados e os
tegumentos extraídos e armazenados para extração de RNA. Tegumentos com 25,
40, 55 e 70 dias de desenvolvimento dos genótipos de soja CD 202 e IAC Santa
Maria 702 também foram submetidos a Microscopia Eletrônica. Após a extração do
RNA total, foram obtidos os RNAm, seguido do cDNA. Em paralelo foi realizada
análise in silico para desenho de primers específicos de genes envolvidos na rota
metabólica da lignina e na deposição de cera nas sementes. Foram detectadas
diferenças na espessura da camada paliçádica dos tegumentos de sementes de soja
dos genótipos CD 202 e IAC Santa Maria 702. O protocolo a base de cloreto de lítio
foi eficiente para extrair RNA total de ambos os genótipos em todas as fases de
coleta. A estratégia de multiplicação unidirecional do cDNA foi eficiente para geração
de um volume considerável para o desenvolvimento de estudos futuros de
expressão diferencial de genes. A análise in silico permitiu o desenvolvimento de 16
primers relacionados aos genes da lignina e da elongase.