Expressão transitória da glicoproteína S1 recombinante do vírus da bronquite infecciosa em células de mamíferos
Resumo
A infecção pelo vírus da bronquite infecciosa (IBV) tem sido causa de importantes
perdas econômicas na avicultura mundial. O IBV possui diversos genótipos e
sorotipos que diferem amplamente em sua patogenicidade, e destes, algumas cepas
possuem distribuição mundial. Dentre as proteínas que compõem o IBV a
glicoproteína S (subdividida em S1 e S2) destaca-se por ser altamente glicosilada. A
subunidade S1 é a principal indutora de anticorpos neutralizantes e resposta imune
protetora, além de ser responsável pela adsorção do vírus aos receptores das
células hospedeiras, por determinar o sorotipo de IBV, e por ser um dos principais
determinantes do tropismo celular. Devido à complexidade dos processos que
ocorrem durante a síntese da glicoproteína S1, o sistema de expressão em células
de mamíferos é o que detém características, como as modificações pós-traducionais
incluindo glicosilação, que o torna indicado para a síntese desta proteína. O
presente estudo teve como objetivo clonar e expressar de forma transitória o gene
sintético da glicoproteína do S1 do IBV elaborado a partir do consenso das
sequências de amostras de campo brasileiras e internacionais, em células HEK 293
(Human embrionary kidney) e HeLa (Human cervical cancer). O gene foi clonado no
vetor de expressão em células de mamíferos e transfectado nos cultivos celulares.
Após 96 horas foi coletado o sobrenadante das células e o lisado celular. A
expressão e purificação da glicoproteína S1 recombinante (rS1-IBV) foram
verificadas a partir da técnica de SDS-PAGE e posteriormente caracterizada através
do Western blotting utilizando soro hiperimune anti-IBV. Houve a detecção da rS1-
IBV a partir do sobrenadante das células. Não houve detecção da proteína
recombinante a partir do lisado celular de ambas as células. O estudo demonstrou
que é possível expressar a glicoproteína S1 recombinante em células de mamíferos.
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