Construção e avaliação da rLTB/SM14 : uma quimera recombinante candidata a uma vacina contra esquistossomose e fasciolose
Resumo
A esquistossomose, causada por Schistosoma mansoni, é a segunda doença parasitária
mais prevalente no mundo causando doença crônica em milhões de pessoas em países
em desenvolvimento. Semelhantemente, a fasciolose, causada pelo trematódeo Fasciola
hepatica, representa um reconhecido problema agrícola responsável por perdas
econômicas assim como causa um significante número de infecções em humanos por
todo mundo. Embora a quimioterapia para ambos os parasitas esteja disponível, ela
tem apresentado limitações, incluindo altas taxas de reinfecção em áreas endêmicas.
Vacinas representam a alternativa mais atraente para inverter este cenário. Assim, a
Organização Mundial da Saúde selecionou a proteína ligadora de ácidos graxos 14kDa
de S. mansoni (Sm14) como uma de duas candidatas à vacina anti-esquistossomose
prioritárias para triagem clínica em humanos. Além disso, a Sm14 é a única proteína
candidata a vacina que induz imunidade protetora significativa contra ambos os
helmintos acima mencionados. O objetivo deste estudo foi desenvolver e avaliar em
camundongos uma vacina de subunidade contendo a Sm14 fusionada com a
subunidade B da enterotoxina termolábil de Escherichia coli (LTB), a qual é um potente
imunoadjuvante; além disso, foi descrever a produção e caracterização de anticorpos
monoclonais (MAbs) contra a Sm14 para usa-los como uma ferramenta para detectar e
caracterizar a Sm14 e para o desenvolvimento de futuro teste diagnóstico. Os genes ltb
e sm14 foram amplificados por PCR a partir do DNA de E. coli e do plasmídeo
pAESm14, respectivamente, e fusionados por PCR. A quimera recombinante foi
expressa em E. coli e purificada por cromatografia de afinidade em coluna com níquel.
Grupos de camundongos suíços não singênicos foram imunizados por via subcutânea
com três doses de rLTB/Sm14, rLTB/Sm14 mais hidróxido de alumínio (Al(OH)3), rSm14
plus Al(OH)3, rLTB ou Al(OH)3. Os níveis de proteção foram determinados através do
número de parasitas recuperados após desafio com cercárias de S. mansoni. O pool de
soros dos camundongos imunizados foi avaliado por ELISA e Western blot. Os
resultados mostraram que a proteína quimera foi capaz de estimular a produção de
anticorpos específicos para Sm14 e LTB, contudo o uso de LTB como adjuvante para
imunização de rSm14 falhou em aumentar a proteção contra o desafio. Além disso, sete
MAbs foram obtidos após imunização de um camundongo BALB/c com rLTB/Sm14. A
isotipagem dos MAbs revelou que cinco foram do isotipo IgG1, um pertencente ao
isotipo IgG2b e outro ao isotipo IgM. Estes MAbs serão úteis para monitorar a
expressão da proteína em sistemas recombinantes, a estabilidade protéica e pode ter
potencial para desenvolver teste diagnóstico.