Maturação e vitrificação de oócitos eqüinos incubados em meio contendo hormônio do crescimento e fator de crescimento semelhante à insulina-I
Resumo
O objetivo do presente estudo foi determinar os efeitos da adição de hormônio
do crescimento eqüino (eGH), fator de crescimento semelhante a insulina-I
(IGF-I) e associação de ambos na maturação in vitro de oócitos eqüinos. Além
de analisar a integridade estrutural de oócitos maturados e vitrificados em
presença de copolímero PVA. Complexos cumulus oophorus compactos (COC)
foram cultivados em TCM199 suplementado com 0,1% BSA e antibióticos.
COC’s (n=122) foram divididos em quatro tratamentos: 1) Controle, sem adição
de hormônios (n=34); 2) 400ng/ml eGH (n=31); 3) 200ng/ml IGF-I (n= 35) e 4)
400ng/ml eGH + 200ng/ml IGF-I (n=22). Após a maturação de 30h, os oócitos
foram fixados (n=37) ou submetidos a vitrificação (n=85). Os oócitos
criopreservados foram expostos a 1,4 M dimetilsulfóxido (DMSO), 1,8 M
etilenoglicol (EG) e 1% copolímero PVA (20% vinil acetato e 80% vinil álcool)
por 3 min, transferidos para TCM com 2,8 M DMSO + 3,6 M EG + 0,6 M
sacarose + 1% copolímero PVA por 1 min e envasados em palhetas abertas
estendidas (OPS). As palhetas foram submetidas ao vapor de nitrogênio por 3
segundos e imersas em nitrogênio líquido. Para o descongelamento, os oócitos
foram transferidos para PBS com concentrações decrescentes de sacarose:
0,5M, 0,25M, 0,125M e PBS com 0,4% BSA; permanecendo 5 minutos em
cada solução. A avaliação da maturação nuclear e citoplasmática foi realizada
por microscopia confocal a laser. Os índices de maturação oocitária foram
26,1% grupo controle, 23,5% eGH, 31,8% IGF-I e 17,6% eGH + IGF-I, não
sendo detectada diferença entre os grupos (p>0,05). Contudo o índice de
retomada da meiose (MI+MII) no grupo com associação dos hormônios foi de
86,7%, sugerindo que a utilização de eGH e IGF-I poderia incrementar esse
índice. Não foram observadas alterações morfológicas nos oócitos
vitrificados/descongelados. Pode-se concluir, que não houve diferença no
índice de maturação nuclear e citoplasmático com a adição de eGH, IGF-I e
associação de ambos. A vitrificação com utilização de copolímeros PVA
mostrou-se viável para a criopreservação de oócitos da espécie eqüina, os
quais permaneceram com membrana plasmática íntegra, não ocorrendo
vacuolização e degeneração celular. Este é o primeiro trabalho que descreve a
utilização de copolímeros PVA na vitrificação de oócitos eqüinos.
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