Efeito da lipoproteína de baixa densidade sobre algumas características funcionais dos espermatozóides eqüinos criopreservados
Resumo
A gema do ovo é uma das principais substâncias usadas na composição dos diluentes de
criopreservação do sêmen de eqüinos. Entretanto, a gema de ovo possui na sua composição
substâncias indesejáveis, as quais podem interferir no processo de criopreservação. O efeito
benéfico da gema de ovo é atribuído, principalmente, à lipoproteína de baixa densidade
(LDL). Este trabalho teve como objetivo avaliar o efeito da substituição da gema de ovo
integral do um diluente modificado de Martin et al. (1979), pela LDL em diferentes
concentrações, sobre a Motilidade Total (MT), Velocidade de Trajeto (VAPµ/ms),
Velocidade Curvilinear (VCLµ/ms), Velocidade Progressiva (VSLµ/ms) e o Choque
Hiposmótico (CHIPO%). No experimento 1 (EXP1) foi utilizado o diluente modificado de
Martin et al.,(1979) gema 20% como controle (T0), e LDL purificada nas concentrações de
8% (T1), 10% (T2) e 12% (T3). Sêmen de cinco garanhões da raça Puro Sangue Inglês foi
utilizado, cujos ejaculados possuíam motilidade ≥ 70%, vigor ≥ 3 e patologias ≤ 30%, além
de fertilidade conhecida. O sêmen foi colhido com o auxílio da vagina artificial modelo
Hannover e, imediatamente, separado da porção de gel. O volume foi mensurado e o sêmen
centrifugado a 800 x g/5min com o diluente G-EDTA, eliminando o plasma seminal. O
pellet formado foi dividido em 4 porções iguais e adicionado aos 4 tratamentos (T0), (T1),
(T2), (T3). A concentração de células espermáticas foi ajustada para 200 x 106
espermatozóides/ml. Para o acondicionamento do sêmen foram usadas palhetas francesas
de 0,5ml. As palhetas foram colocadas em uma máquina de congelação (TK 3000®), e a
curva seguiu um padrão de resfriamento até 5ºC e, posteriormente, até -120ºC, onde foram
colocadas diretamente no nitrogênio líquido. No experimento 2 (EXP2) foi utilizado sêmen
de 3 garanhões da raça Crioula, utilizando os procedimentos do EXP1, entretanto, a
centrifugação do sêmen foi realizada sem a adição no diluente G-EDTA e a concentração
espermática foi de 50 x 106 espermatozóides/ml. No EXP2 foi utilizado o diluente
modificado de Martin et al.(1979) (T0), e a LDL purificada na concentração de 8% no
lugar da gema de ovo (T1). O descongelamento do sêmen foi realizado em banho-maria a
37°C / 30s nos EXP1 e EXP2. No EXP1, as amostras foram submetidas à análise
computadorizada (Computer-Assisted Semen Analysis - CASA), onde foram observadas a
Motilidade Total (MT), Velocidade de Trajeto (VAPµ/ms), Velocidade Curvilinear
(VCLµ/ms) e Velocidade Progressiva (VSLµ/ms). No EXP2 foram avaliadas a (MT) e o
teste para avaliação da integridade de membrana, choque hiposmótico, (CHIPO). As
variáveis respostas foram analisadas através do programa Statitix®, utilizando a análise da
variância com medidas repetidas e comparação de médias pela diferença mínima
significante (LSD). No EXP1, as MT médias nos tratamentos T0 (23,3%), T1 (18,0%), T2
(15,1%) e T3 (16,9%), não diferiram (P>0,05). A VAP nos tratamentos T0 (86,0µ/ms) e T1
(81,5µ/ms) não diferiu (P>0,05). O T0 foi superior (P<0,05) aos tratamentos T2
(77,2µ/ms) e T3 (77,9µ/ms), entretanto, o T1, T2 e T3 foram iguais (P>0,05). A VCL nos
tratamentos T0 (158,2µ/ms) e T1 (147,3µ/ms) não diferiu (P>0,05), entretanto, o T0 foi
superior (P<0,05) aos tratamentos T2 (138,2/µms) e T3 (141,8/µms). A VSL nos
tratamentos T0 (61,3 µ3/ms), T1 (60,6µ/ms), T2 (58,1µ/ms) e T3 (57,8µ/ms), não foi
diferente (P>0,05). No EXP2 , MT média nos tratamentos T0 (35,5%) e T1 (48,8%) diferiu
(P<0,05) sendo T1 superior a T0. O CHIPO nos tratamentos T0 (30,1%) e T1 (27,8%) não
diferiu (P>0,05) sendo T0 igual a T1. Dessa forma, concluímos que a LDL na concentração
de 8%, pode substituir a gema de ovo na composição do diluente modificado de Martin et
al.(1979) utilizado para criopreservar sêmen eqüino.
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