Aplicação da glicoproteína D recombinante de Herpesvírus bovino 5 como antígeno em teste de imunodiagnóstico e vacina de subunidade
Resumo
As novas estratégias no desenvolvimento de vacinas contra o Herpesvírus bovino 1
e 5 focam nas glicoproteínas do envelope viral, como a gD, a qual atua na ligação e
fusão do envelope viral com a membrana de células permissivas. A gD está
presente em grande quantidade no envelope e estimula resposta imune humoral e
celular no hospedeiro. O diagnóstico sorológico através de teste imuno enzimático,
como o ELISA Indireto, também utiliza as glicoproteínas do envelope viral, uma vez
que estas estão expostas na estrutura viral. Desta forma, o objetivo deste estudo foi
aplicar a gD recombinante do BoHV-5 expressa em Pichia pastoris, após
caracterização antigênica, como antígeno no desenvolvimento de uma vacina de
subunidade e de um ELISA Indireto visando o controle da infecção por BoHV-5, o
qual é o agente responsável por surtos de meningoencefalite que ocasionam perdas
econômicas na pecuária brasileira. A vacina de subunidade desenvolvida foi capaz
de estimular resposta imune humoral em camundongos, com a presença de
anticorpos neutralizantes, quando administrada sozinha ou com adjuvantes
imunológicos. A resposta imune celular foi observada através do aumento da
expressão de mRNA de citocinas associadas a este tipo de resposta, como IFN-!,
IL-17 e GM-CSF, quando a vacina foi formulada com o adjuvante oleoso EmulsigenDDA. O ELISA Indireto desenvolvido demonstrou alta sensibilidade (100%) e
especificidade (92.9%) quando comparado a técnica de soroneutralização viral, a
qual é considerada a técnica padrão para o diagnóstico sorológico de BoHV-1 e -5.
A rgD de BoHV expressa em P. pastoris possui conformação tridimensional
semelhante a gD nativa de BoHV-5. A rgD é imunogênica, capaz de induzir
formação de anticorpos neutralizantes e a vacina de subunidade utilizando a rgD
como antígeno induz uma resposta imunológica Th1/Th2 balanceada. A
antigenicidade da proteína foi confirmada com o seu uso em um ELISA Indireto, o
qual pode ser utilizado para triagem rápida de rebanhos infectados com BoHV-5.
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