Proteína ErpY-like de Leptospira spp.: da ciência básica à aplicação no diagnóstico
Date
2019-06-24Metadata
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A leptospirose é uma zoonose causada por bactérias patogênicas do gênero Leptospira. Esta doença pode afetar diversos animais, sendo considerada um problema de saúde pública e responsável por perdas na pecuária. O “padrão ouro” para o diagnóstico da leptospirose é a soroaglutinação microscópica (MAT), entretanto apresenta limitações, como elevado número de reações cruzadas, é bastante laboriosa e demorada. Por este motivo, a busca por alternativas para o controle da leptospirose torna-se necessária. A proteína ErpY-like foi reportada como potencial fator de virulência de Leptospira interrogans, e assim, possivelmente envolvida no processo de infecção e importante no desenvolvimento de novos testes de diagnóstico e como antígeno vacinal. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi a produção da proteína ErpY-like em sua forma recombinante, sua caracterização in silico e aplicação no diagnóstico. Para tal, a proteína foi avaliada através de ferramentas de bioinformática e a presença do gene erpY-like em diferentes sorovares de Leptospira spp. investigada por PCR. A proteína ErpY-like foi produzida na forma recombinante (rErp-like) utilizando sistema heterólogo procarioto (Escherichia coli) e sua antigenicidade avaliada em ensaio do tipo ELISA (do inglês Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) indireto com soro de animais infectados. Camundongos foram imunizados com a proteína rErpY-like para produção de anticorpos policlonais (pAbs), os quais foram titulados em ELISA indireto e testados quanto à reatividade com a proteína nas formas recombinante e nativa de L. interrogans em ELISA indireto e imunofluorescência indireta. Por fim, a proteína rErpY-like foi testada no desenvolvimento de um ELISA indireto para o diagnóstico da leptospirose suína. Na PCR, o gene erpY-like foi amplificado em todos os sorovares testados. A proteína ErpY-like foi expressa com sucesso utilizando sistema heterólogo, com tamanho esperado de 13 kDa e rendimento de 25 mg.L-1. Sua antigenicidade foi confirmada em ensaio de ELISA indireto, onde a proteína recombinante reagiu com soro humano, suíno e canino naturalmente infectados. Os pAbs produzidos ligaram-se a proteína ErpY-like nativa, tanto em células inteiras quanto lisadas de leptospiras. Na imunofluorescência indireta também foi observada reação dos pAbs, marcando com fluorescência a proteína ErpY-like nativa na Leptospira. Além disso, o uso da proteína rErpY-like no ELISA indireto mostrou-se sensível e específica para o diagnóstico da leptospirose suína, com sensibilidade de 96,8% e especificidade de 100%. Estes resultados demonstraram que a proteína ErpY-like é um alvo promissor no desenvolvimento de ensaios para o controle da leptospirose.