Clonagem e expressão do gene da nucleoproteína e de um gene sintético da glicoproteína do vírus da raiva em Pichia pastoris
Abstract
O vírus da raiva apresenta dois antígenos principais: a nucleoproteína, uma
proteína interna conservada antigênica e geneticamente e a glicoproteína, uma
proteína externa responsável pela adsorção do vírus à célula hospedeira e pela
indução da produção de anticorpos neutralizantes. O desenvolvimento da
tecnologia do DNA recombinante iniciou uma nova perspectiva no controle da
Raiva, já que vacinas recombinantes não têm patogenicidade residual e são
produzidas com as proteínas antigênicas do vírus, sem sua presença. Além
disso, as proteínas recombinantes podem ser expressas com a finalidade de
serem usadas em diagnóstico. O objetivo deste trabalho foi clonar e expressar
a glicoproteína e a nucleoproteína do vírus da raiva utilizando o sistema Pichia
pastoris e avaliar a antigenicidade e imunogenicidade destas proteínas através
do Dot blotting, SDS page, Western blotting, inibição da imunofluorescência e
ELISA. A glicoproteína demonstrou ser antigênica ao ser reconhecida por
anticorpos anti-rábicos provenientes de animais experimentalmente infectados
com o vírus rábico cepa CVS. A nucleoproteína recombinante teve sua
expressão confirmada pelas técnicas de Dot blotting e Western blotting ao ser
reconhecida por anticorpos monoclonais anti-histidina. Podemos concluir que a
levedura P. pastoris é um sistema eficiente para clonagem e expressão da
nucleoproteína e glicoproteína do vírus rábico.