Integração e expressão do gene ltb-r1 em plantas de tabaco
Abstract
Nas últimas décadas, o desenvolvimento de plantas geneticamente modificadas
tornou-se uma realidade consolidada. Nesse sentido, utilizando-se da engenharia
genética, é possível obter plantas servindo como biorreatores na produção de
tecidos ou orgãos expressando antígenos que podem ser facilmente utilizados como
vacina. Os sistemas de expressão em plantas como tomate, alface, tabaco que
servem como modelos desse processo, apresentam várias vantagens, entre elas, a
conservação da maquinaria eucariótica que promove as modificações póstraducionais das proteínas e ainda a possibilidade de produção em larga escala.
Dentro desta estratégia de produção de proteínas, pode-se citar a pneumonia
micoplásmica suína (PMS), causada pelo agente Mycoplasma hyopneumoniae, uma das
principais doenças de suínos que provoca elevadas perdas econômicas em todo
mundo, e tem, na tecnologia do DNA recombinante, uma alternativa de
desenvolvimento de vacinas mais efetivas. O objetivo do trabalho foi transformar
plantas de tabaco para sua utilização como biorreator na produção de um antígeno
vacinal contra a PMS. Folhas e entrenós foram cultivados em diferentes
concentrações de BAP e AIA. As melhores taxas de regeneração foram encontradas
utilizando 1,5 mg.L-1 de BAP e 0,1 mg.L-1 de AIA para segmentos de folhas e
entrenós. O teste de seleção utilizando canamicina mostrou-se altamente eficiente,
obtendo-se a supressão da regeneração com 30 mg.L-1 e 100 mg.L-1 para
segmentos de folhas e entrenós, respectivamente. Colônias recombinantes de A.
tumefaciens contendo ltb-r1 foram co-cultivadas com entrenós e segmentos foliares de
plantas germinadas in vitro. Após esta etapa, os explantes foram transferidos para
meios de seleção, visando selecionar células possivelmente transformadas. O DNA
genômico das plantas regeneradas e putativamente transformadas foi extraído e
amplificado por PCR, na qual foi possível visualizar uma banda referente ao ltb-r1. A
detecção da integração e transcrição do gene foi realizada por Southern blot e RTPCR, respectivamente. Em ambas as técnicas, foi possível verificar a presença de
uma banda do tamanho esperado para ltb-r1, demonstrando assim, a integração e
expressão do gene. Entretanto, não foi possível detectar com precisão, através dos
testes utilizados, a proteína recombinante.