Expressão heteróloga da EMA-2 de Theileria equi em Pichia pastoris
Abstract
A Piroplasmose equina causada por Theileria equi é considerada uma das mais
importantes doenças dos equinos em regiões tropicais e subtropicais. Acomete os
equinos de forma endêmica no Brasil levando a significativas perdas econômicas.
Países livres da doença não permitem a entrada de animais provindos de regiões
endêmicas devido à alta prevalência de animais assintomáticos. Para controle e
prevenção desta enfermidade se faz necessário desenvolvimento de métodos de
diagnóstico eficazes. Os estudos sobre o diagnóstico imunológico para Theileriose
concentram-se em antígenos da membrana externa. O principal antígeno da
membrana externa deste protozoário, Equi Antígeno Merozoite (EMA) é reconhecido
por anticorpos de cavalos positivos para Theileria equi. Neste estudo reportamos a
expressão, purificação e a caracterização da proteína EMA-2 de Theileria equi na
levedura Pichia pastoris. O gene EMA-2 foi clonado no vetor de expressão pPICZαB
sendo a proteína expressa, secretada de forma solúvel ao meio. A expressão e
antigenicidade da proteína rEMA-2 foi demonstrado por Dot e Western Blotting
utilizando-se anti-histidina e anticorpos de equinos clinicamente positivos para
Theileriose. Um ELISA indireto com rEMA-2 foi realizado e foi possível determinar
uma diferença de mais de três vezes entre os soros de equinos confirmados como
positivos e negativos para Theileriose. Com os dados obtidos neste trabalho
podemos sugerir que a proteína rEMA-2 é um potencial candidato para ser utilizado
como antígeno em imunodiagnóstico de T. equi.