Isolamento de fungo endofítico a partir de Achyrocline satureioides: caracterização fitoquímica e análise de efeito antiglioma
Resumo
O Glioblastoma multiforme (GBM) é o tumor cerebral primário mais maligno caracterizado por instabilidade genômica e infiltração difusa, promovendo assim, um ambiente oxidativo, proliferação celular e difícil prognóstico para os pacientes. Os fungos endofíticos residem no interior dos tecidos saudáveis de plantas e representam uma importante fonte de compostos antitumorais. Achyrocline satureioides, uma planta medicinal popularmente conhecida como “marcela”, possui interessantes propriedades farmacológicas. Uma vez que não há evidências a cerca da composição de fungos endofíticos de A. satureioides, o objetivo deste estudo foi isolar um fungo endofítico, obter extratos brutos e fracionados, caracterizar quimicamente as frações mais efetivas, investigar seu efeito antiglioma e supressão do estresse oxidativo no ambiente tumoral. Os metabólitos produzidos pelo endófito isolado foram extraídos com os solventes orgânicos diclorometano e acetato de etila, resultando nos extratos brutos eDCM e eAcoEt, os quais foram submetidos a um fracionamento guiado. O perfil citotóxico dos extratos brutos (24-72 h) e fracionados (48 h) foi determinado mediante ensaio de MTT e Sulforodamida B (SRB) sobre linhagens de glioma C6 e U87MG. Ensaio clonogênico, análise do ciclo/morte celular e parâmetros de estresse oxidativo foram avaliados sobre linhagem C6 exposta aos extratos brutos, fração mais efetiva de cada extrato e composto 1 por 48 h. Os dados foram analisados por ANOVA seguido de post-hoc de Tukey e considerados significativos para P˂0.05. No presente estudo os extratos eDCM e AcoEt do fungo endofítico isolado apresentaram citotoxicidade significativa com IC50 de 1.23-2.66 μg/mL e 29.92-87.06 μg/mL, respectivamente após 48 h, com consequente aumento do sistema antioxidante, como o conteúdo sulfidril (SH), enzimas superóxido dismutase (SOD), catalase (CAT) e glutationa peroxidase (GPx). As frações F1DCM, F2DCM, F3DCM e F4DCM (obtidas de eDCM), bem como, F3AcoEt e F4AcoEt (obtidas de eAcoEt) exibiram efeitos citotóxicos. Observamos ainda que F3DCM e F3AcoEt apresentaram atividade antiproliferativa significativa com IC50 de 1.09 e 21.43 μg/mL, respectivamente. A F3AcoEt induziu um acúmulo de células em apoptose tardia no estágio G2/M. Por outro lado, a F3DCM reduziu significativamente a formação de colônicas em 90%, exibiu aumento da defesa antioxidante e diminuição na produção de espécies reativas de oxigênio (EROs). Nenhuma alteração foi observada em cultivo primário de astrócitos expostos aos extratos brutos e fracionados. Assim, considerando a atividade antiglioma seletiva, a fração F3DCM foi caracterizada por cromatografia líquida de ultra-eficiência e ressonância nuclear magnética. Com base nestes dados, identificamos a Sch-642305, lactona produzida por fungos endofíticos, a qual inibiu 80% da viabilidade celular das células de glioma e promoveu parada no ciclo celular em G2/M induzindo apoptose. A Sch-642305 aumentou a atividade das enzimas SOD e CAT, conteúdo SH e suprimiu a produção de EROs. Além disso, foi possível isolar um composto proveniente da fração F4DCM, identificado como 5-metil-meleína, entretanto estudos são necessários a fim de elucidar seus efeitos antiglioma. Estes resultados indicam que os compostos produzidos pelo fungo endofítico isolado a partir de A. satureioides representam uma fonte promissora para a busca por novos agentes terapêuticos contra o GBM.