Expressão, caracterização e sinalização da citocina recombinante IL-17A de Bos taurus
Abstract
A interleucina 17A de Bos taurus é uma citocina pró-inflamatória, que atua principalmente na defesa do organismo contra infecções bacterianas, fúngicas, víricas e de protozoários. Sua ação inflamatória é decorrente da sinalização para expressão de outras citocinas pró-inflamatórias que geram o recrutamento de leucócitos para o sítio de infecção. O objetivo do trabalho foi a expressão, caracterização e avaliação da sinalização da rIL-17A de Bos taurus. Foi realizada a clonagem em vetor pAE, e a expressão realizada em cepa Rosetta™ de Escherichia coli. A proteína foi expressa de forma solúvel, com massa molecular de aproximadamente 15 kDa, e caracterizada pela técnica de Western blot utilizando anticorpo monoclonal (mAB) anti-6xHis. Esplenócitos de camundongo e de bovinos, células mononucleares periféricas de bovinos (PBMCs) e células de linhagem de rim bovino (Madin-Darby Bovine Kidney, MDBK) estimuladas por 24 horas com 10µg de rIL-17A. As células foram coletadas e o mRNA total extraído para a síntese de cDNA. Esse material foi utilizado para avaliação da sinalização da proteína recombinante, através da detecção dos níveis de transcrição do mRNA de IL-17, IFNγ, IL-4 e IL-2, realizado pela técnica de qPCR. A rIL-17A mostrou que não gerou efeito tóxico nas células e manteve sua atividade biológica, elevando os níveis de transcrição de IL-17 em todas as células estimuladas. Também pode-se observar aumento dos níveis de transcrição de IFNγ, IL-4 e IL-2. Entretanto, ainda são necessários mais estudos para que se possa estabelecer a rIL-17A como um imunobiológico e potencial adjuvante vacinal para bovinos e outras espécies.