Avaliação de novas terapias in vitro contra o melanoma e câncer de bexiga
Date
2020-02-21Metadata
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O câncer é considerado uma doença multifactorial causada por uma proliferação celular anormal e apresenta um impacto econômico no sistema de saúde a nível mundial. Os tipos de câncer abordados neste estudo foram melanoma e câncer de bexiga. No melanoma foram avaliadas as cepas auxotróficas de Mycobacterium bovis (BCG ΔLeuD e BCG recombinante ΔLeuD/Ag85B) e em combinação com o fármaco imiquimode sobre linhagem WM1366 de estágio IV para estudar o efeito na inibição celular e em linhagem de macrófago J774A.1 para determinar a resposta imune celular. Na linhagem WM1366 foram realizados os testes de MTT, Anexin e qRT-PCR, e em linhagem de macófago J774A.1 foi realizado qRT-PCR. No câncer de bexiga foram avaliados compostos organocalcogênios (azida de β-arilcalcogênio) contendo telúrio (5c e 5j) sobre linhagem 5637 de grau II para avaliar a atividade citotóxica e antitumoral. Foram realizados o teste de citotoxicidade (MTT),
live/dead, DAPI, qRT-PCR e docking molecular. Os resultados obtidos mostraram que para
o melanoma (WM1366), o IC50 de inibição celular do imiquimode foi de 42.63 ± 4.28 µM em 48 horas. A combinação de ΔleuD/Ag85B+imiquimode em 40 µM mostrou 59,41% de inibição do crescimento, a combinação em 50 µM mostrou 61,30% e com 60 µM foi de um 80,08% de inibição do crescimento quando comparado ao imiquimode isolado (48,22%, 51,77%, e 57,97). A indução de apoptose mostrou as diferentes porcentagens de apoptose inicial e tardia na concentração de 60 µM nos tratamentos BCG ΔleuD + imiquimode (15,77%), BCG ΔleuD/Ag85B + imiquimode (13,96%), imiquimode (19,91%) quando comparado ao controle não tratado (3,78%) mostrando diferenças estatisticamente significantivas entre os tratamentos. Na expressão gênica em WM1366, BAX e Caspase 3
mostraram um incremento nos tratamentos BCG ΔleuD/Ag85B e ΔleuD/Ag85B + imiquimode; e em J774A.1 no tempo de 24 horas, a combinação BCG ΔleuD/Ag85B + imiquimode aumentou os níveis de mRNA de citocinas pró-inflamatórias (IL-6, IL-12, TNF-α e IFN-γ) quando comparadas ao imiquimode e as células não tratadas (P<0,05). Por outro lado, em câncer de bexiga (5637) os compostos 5c e 5j mostraram valores de IC50de inibição celular de 1.57± 0.70 µM e 0.48± 0.13 µM (48h) respectivamente. Na análise da apoptose, observamos condensação da cromatina, mostrando 13% das células apoptóticas em 5c e 20,3% em 5j, em comparação às células não tratadas (2,34%). Na expressão gênica o composto 5c aumentou a expressão relativa dos genes p53, Casp 3 e 9, SOD e CAT, e o composto 5j aumentou os genes p53, p21, Caspase-3 e Caspase-9, Bax, SOD, CAT, GPx,
GR e iNOS. No docking molecular, 5c apresentou afinidade de ligação à Survivin, Bcl-XL, RSK2, SGK1 e 5j mostrou afinidade de ligação ao gene SGK1. Em conclusão, para o melanoma, a combinação do tratamento BCG ΔleuD/Ag85B+imiquimode mostrou inibição do crescimento celular em WM1366, e aumento na resposta imune celular em J774A.1. Assim mesmo, para o câncer de bexiga os compostos 5c e 5j mostraram atividade citotóxica, e um aumento na expressão das proteínas pró-apoptóticas e enzimas antioxidantes, o que poderíamos sugerir de forma geral que os tratamentos avaliados neste estudo poderiam ter efeitos antitumorais promissores para estes tipos de cânceres.
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